①培养基消毒：将配制分装好培养基的三角瓶或其他容器放入高压灭菌锅中，在15磅／英寸2的压力下，经20分钟高压灭菌即可
④材料处理及消毒：花卉组织培养取嫩茎、花托、叶柄、叶片均可，取得材料后，需先清理，去掉多余部分，然后冲洗、洗涤剂洗涤、漂清后放入接种室或超净台上，用70％的酒精浸泡半分钟，进行表面消毒，再在10％的漂粉溶液中消毒10分钟左右，取出后用无菌水冲洗4～5次，即可接种。草花用嫩茎、花托为好；球根花卉用茎顶、鳞茎盘、鳞叶等为好。一般材料的选择以幼嫩部分为好
2.花卉组织培养的途径
选定培养基以后，需把大量元素、微量元素、有机物都配成母液，扩大倍数为稀释液，贮存备用。使用时，根据所需配制的量，在稀释液中加一些肌醇、水解酪蛋白、蔗糖等，再加铁盐（需用乙二胺四乙酸二钠（Na2一EDTA）加硫酸亚铁配制成螫合铁）成营养液，然后吸取需用量，加入培养基中，再测其酸碱度（一般pH值在5．5～6．5之间即可），最后加琼脂煮沸后分装入三角瓶或试管中，封口待用
培养基的种类很多，采用哪一种培养基，对于培养是否成功有很大的关系，在1950～19舰年初常采用White培养基，但后来有很多新的培养基，其中Ms是Murashige和skoog1962；ER是Erikssonl965；B5是Gambor等1968；SH是shenk和Hildebrandtl972；HE是Heller1953提出来的，见表1表2
将试管苗从瓶中耿出，洗去残存的培养基，移植到准备好的基质中去，随即用细喷壶喷水后加玻璃或塑料罩，3～4日内不必浇水，以后浇些清水，1周后见苗已挺直，可去罩浇培养液（过去所用培养基的大量及微量元素减半配成），以利生长，2～4周后可进行常规栽培。试管苗发根后，必须随即转移到栽培基质中去，这种基质可以用培养土、蛭石、珍珠岩等配成
（1）培养墓配制
（3）通过胚状体发主
②器皿与用具的消毒：接种用具及玻璃器皿、洗涤材料用的无菌水，用牛皮纸包好后和培养基一起放在高压灭菌锅中消毒灭菌
由培养的植株产生愈伤组织，再通过悬浮培养，或直接产生大量的胚状体，再发育成完整植株
花卉组织培养的操作可分为培养基配制、消毒灭菌、接种、培养等几方面
接种完毕后即可置于培养室，在恒温、加光条件下进行培养，培养一段时间后，根据情况将材料从诱导愈伤组织的培养基转到分化培养基（也有只用一种培养基就可直接诱导分化成绿苗的），最后转移到生根培养基上
污染的途径是器皿、用具、材料的带菌，以及接种室的空气、墙壁、地板等的不清洁，故必须针对所提及的几方面，进行严密的消毒灭菌。消毒灭菌非常重要，关系到组织培养的成败
通过由培养的组织，产生芽及根，器官发生由于培养材料的不同又可分为两方面：一是培养花卉植物的茎尖产生大量芽，再将芽分离转移培养成植株；二是培养花卉植物器官外植体产生不定芽，发育成植株
（3）引培养条件
（2）消毒灭菌
（4）培养
将消毒好的材料置于培养皿中，用解剖刀切去其边缘，再切成小块接种在培养基上，使组织块与培养基密合，不得将材料陷于培养基中，接好后随即将瓶口封好待培养。接种用的钳子、解剖刀、接种针等均需在火焰上消毒后用，用后再消毒
（3）接种
（2）通过煎伤组织分化成株
将花卉植物体的一小片组织培养成愈伤组织，再诱导分化成芽和根，成为完整植株
（1）通过器官发生
培养室要求清洁卫生，减少污染。培养条件，按培养对象的种类不同而有所不同，温度条件一般在23～26℃左右的恒温条件下。光照条件对器官形成有作用，一般范围是1000～3000勒克司，每日12～16小时，高于3000勒克司有强烈抑制作用
在花卉组织培养实践中，用植物的组织或细胞培养成植株，也就是试管培养，可以通过三条途径
在花卉组织培养中用MS培养基最多。这些培养基中MS培养基应用最广泛。ER培养基与MS培养基相似。B5培养基在愈伤组织和悬浮培养方面做了不少试验，对有些植物很适合，SH培养基与B5相似。HE培养基为欧洲许多实验室所用，但矿物盐浓度稍低，应用范围不太广
（5）试管苗移栽
③接种室消毒：接种室的地面及墙壁，在接种前后均要用1：50的新洁尔敏湿性消毒，每次接种前还要用紫外线灯照射消毒30～60分钟，并用70%的酒精，在室内喷雾，以净化空气，最后是超净台台面消毒，可用新洁尔敏擦袜及70%酒精消毒
3．花卉组织培养的操作方法